CRISPR/Cas9 原代细胞转染，为什么越来越多实验室选择电转染？

CRISPR/Cas9技术的成熟，使基因编辑逐渐从模式细胞系走向原代细胞和临床相关细胞模型。然而，在实际操作中，许多实验人员很快会遇到一个现实问题：CRISPR体系本身并不难，难的是如何把它高效、温和地送进原代细胞。在这一背景下，电转染逐渐成为原代细胞CRISPR实验中的主流选择之一。一、CRISPR/Cas9在原代细胞中的递送难点与常规细胞系相比，原代细胞在进行CRISPR编辑时往往面临多重挑战：对外界刺激高度敏感转染后细胞存活率要求高编辑效率需要稳定、可重复递送时间过长可...

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OD600 到底能不能用超微量分光光度计来测？

在细菌培养、蛋白表达和生长状态判断中，OD600是实验室常用、也是最容易被“想当然”的指标之一。一个被频繁问到的问题是：OD600能不能用超微量分光光度计来测？会不会不准？答案并不是简单的“能”或“不能”，而是：取决于你“为什么测OD600”，以及“你需要它来做什么判断”。一、先说结论✅可以用超微量分光光度计测OD600⚠但并不是所有OD600场景都适合如果不区分使用场景，就容易出现两种认知：一种觉得“超微量测OD600都不靠谱”另一种觉得“只要能出数就行”这两种看法都不完整...

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原代细胞转染效率低？实验中常被忽视的几个关键原因

在基因编辑、细胞功能研究和转化医学实验中，原代细胞转染始终是一个绕不开的技术难点。不少实验人员都有类似经历：在常规细胞系中效果良好的转染方案，一旦应用到原代细胞中，转染效率明显下降，甚至伴随严重的细胞死亡。那么，原代细胞转染失败的原因究竟在哪里？一、原代细胞与常规细胞系的本质差异与HEK293、HeLa等永生化细胞系相比，原代细胞通常具有以下特点：内吞活性较低对外界刺激高度敏感对培养条件依赖性强修复能力有限这意味着：👉原代细胞并不“适合”依赖内吞机制的转染方式。二、脂质体转...

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原代细胞与免疫细胞转染为什么这么难？一种更稳定的电转染解决方案

在基因编辑、细胞治疗和免疫研究中，高效、低损伤的细胞转染始终是实验成功的关键步骤之一。然而，许多实验人员都有相同的困扰：脂质体在常规细胞系中效果尚可，但一遇到原代细胞、干细胞或免疫细胞，转染效率和细胞存活率往往难以兼顾。针对这一难题，基于微量电转染（Microporation）技术的ExTransfection™电转染系统，正在成为越来越多实验室的选择。一、为什么传统转染方法在原代细胞中频频失效？1️⃣脂质体转染的天然局限脂质体依赖细胞的内吞机制，而原代细胞、T细...

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很多实验室忽略的一个事实：DNA 定量不是“测一次就够了”

在PCR、qPCR、NGS建库以及分子克隆等实验流程中，DNA定量往往被视为一个**“标准动作”**：测一次浓度、看一下A260/A280，然后进入下一步。但在实际技术支持中，一个被反复验证的事实是：DNA定量并不是“测一次就结束”的步骤，而是一个需要被反复验证可靠性的基础环节。忽略这一点，往往会给后续实验埋下隐患。DNA定量，真正的作用是什么？从技术本质上讲，DNA定量并不是为了得到一个“好看的数值”，而是为了确保：下游实验的投料量是可控的不同批次、不同人员之间的数据是可比...

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