CRISPR/Cas9 原代细胞转染，为什么越来越多实验室选择电转染？

CRISPR/Cas9 技术的成熟，使基因编辑逐渐从模式细胞系走向原代细胞和临床相关细胞模型。然而，在实际操作中，许多实验人员很快会遇到一个现实问题：

CRISPR 体系本身并不难，难的是如何把它高效、温和地送进原代细胞。

在这一背景下，电转染逐渐成为原代细胞 CRISPR 实验中的主流选择之一。

一、CRISPR/Cas9 在原代细胞中的递送难点

与常规细胞系相比，原代细胞在进行 CRISPR 编辑时往往面临多重挑战：

• 对外界刺激高度敏感

• 转染后细胞存活率要求高

• 编辑效率需要稳定、可重复

• 递送时间过长可能引发非特异效应

这些特点决定了：
👉 CRISPR 在原代细胞中的递送方式，往往比编辑工具本身更关键。

二、化学转染在 CRISPR 原代细胞应用中的局限

脂质体等化学转染方法在 CRISPR 实验中仍被广泛使用，但在原代细胞中常出现以下问题：

1. 递送效率不稳定
   化学转染依赖内吞过程，而原代细胞内吞活性有限，导致 Cas9 或核酸进入细胞比例偏低。

2. 细胞毒性难以控制
   为提高编辑效率而增加试剂用量，往往会显著降低细胞存活率。

3. 作用时间过长
   质粒或核酸在细胞内持续表达，可能增加脱靶风险。

在对安全性和可控性要求更高的原代细胞实验中，这些问题尤为突出。

三、电转染在 CRISPR 原代细胞中的优势

电转染通过瞬时电场在细胞膜上形成短暂通道，使 Cas9 及其相关组分直接进入细胞质，从机制上规避了内吞限制。

在 CRISPR 原代细胞应用中，电转染的优势主要体现在：

• 递送过程快速、直接

• 不依赖细胞内吞活性

• 对细胞类型的适应性更强

尤其在原代细胞、免疫细胞等难转染模型中，其稳定性优势更加明显。

四、RNP 递送方式与电转染的协同优势

近年来，越来越多实验室采用 Cas9–sgRNA RNP（核糖核蛋白）复合物 进行 CRISPR 编辑，其优势包括：

• Cas9 在细胞内作用时间短

• 脱靶风险相对降低

• 编辑过程更可控

而电转染正好与 RNP 递送方式高度匹配：

• 可实现瞬时、高效递送

• 不需要转录和翻译过程

• 有利于提高编辑效率与一致性

因此，在原代细胞 CRISPR 应用中，“RNP + 电转染"正在成为主流技术路线。

五、微量电转染技术的进一步优化

传统电转染在原代细胞中仍可能带来一定损伤。为此，近年来出现的微量电转染（Microporation）技术通过：

• 缩小转染体积

• 优化电场均匀性

• 减少热效应

在保证 CRISPR 编辑效率的同时，进一步提升了细胞存活率，使其更适合用于珍贵样本和功能研究。

在这一技术路线下，部分新型台式电转染系统已被应用于原代细胞和免疫细胞的 CRISPR 实验中，用于实现更加稳定、可重复的编辑效果。

六、联系我们

在 CRISPR/Cas9 原代细胞研究中，递送方式正在从“辅助手段"转变为“关键环节"。
随着对编辑效率、安全性和重复性要求的不断提高，电转染，尤其是基于微量电转染理念的技术方案，正逐渐成为越来越多实验室的选择。

如需了解 CRISPR/Cas9 在原代细胞中的电转染思路或相关技术方案，可联系相关技术支持获取进一步信息。