牛角膜浊度仪在BCOP试验中的应用：试验原理、操作流程及IVIS/LIS选型

一、BCOP试验为什么受到关注？

2025年8月，国家药品监督管理局发布2025年第32号通告，将《牛角膜浑浊度和渗透性试验方法》等5项方法纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，并于2026年3月1日起正式实施。

BCOP试验采用屠宰场来源的离体牛角膜作为试验系统，通过检测受试物造成的角膜浑浊度变化和渗透性变化，评价其潜在眼刺激或严重眼损伤风险。

需要注意的是，新方法纳入规范并不等于所有化妆品企业都必须购买牛角膜浊度仪。对于计划在实验室内部开展BCOP试验的检验检测机构、化妆品企业、CRO或科研单位，牛角膜浊度测量设备属于试验系统中的关键仪器之一。

二、BCOP试验的基本原理

角膜受到刺激性物质作用后，通常可能出现两类变化：

1. 角膜透明度下降，表现为浑浊度升高；

2. 角膜屏障功能受损，导致荧光素钠渗透量增加。

BCOP试验分别测量这两项指标，并根据规定的评价模型计算刺激性评分。

1. 角膜浑浊度测量

牛角膜浊度仪通过光学系统测量光线穿过角膜前后的变化，得到角膜浑浊度数据。

角膜越透明，透过角膜的光线越稳定；角膜损伤越明显，光散射或光衰减通常越显著。因此，光源稳定性、光路一致性、检测重复性以及角膜夹持器的安装状态，都会影响浑浊度测量结果。

2. 角膜渗透性测量

完成受试物暴露和浑浊度测量后，通常使用荧光素钠评价角膜渗透性。

荧光素钠穿过受损角膜进入后腔，再通过酶标仪或分光光度计测量相应吸光度。常用检测波长为490 nm，因此试验资料中经常出现OD490这一参数。

需要说明的是，牛角膜浊度仪主要负责角膜浑浊度检测；完整开展BCOP试验通常还需要OD490检测设备、角膜夹持器、恒温设备以及相关试剂耗材。

三、BCOP试验的一般操作流程

不同标准、受试物类型和实验室SOP可能存在差异，一般试验流程包括以下环节：

1. 牛眼获取和检查

牛眼通常来源于正规屠宰场。获取后应按照规定条件运输，并对角膜进行初步检查，排除存在损伤、明显浑浊或其他异常的角膜。

2. 角膜分离与安装

将符合要求的角膜从牛眼中分离，保留适当巩膜环，并安装到角膜夹持器中。安装过程中需要避免折叠、拉伸、气泡和机械损伤。

3. 平衡与基线测量

安装后的角膜在规定温度和培养条件下进行平衡，随后测量初始浑浊度。

基线数据异常的角膜应按照试验方法和实验室SOP进行判断，不宜直接进入后续试验。

4. 受试物暴露

将受试物加入角膜上皮侧。液体、固体、乳霜、表面活性剂等不同类型样品，其给样方式、暴露时间和冲洗方式可能不同，应根据适用方法确定。

5. 冲洗与后处理

暴露结束后对角膜进行冲洗，并按照规定条件进行后续孵育。冲洗是否充分、受试物是否残留，是影响试验重复性的常见因素。

6. 暴露后浑浊度测量

再次使用牛角膜浊度仪测量角膜浑浊度，并结合基线值、阴性对照和阳性对照进行数据处理。

7. 渗透性检测

向角膜上皮侧加入荧光素钠。孵育完成后，从角膜内皮侧收集介质，并测量OD490等渗透性指标。

8. 结果计算与判定

根据试验采用的仪器类型和评价路径，计算IVIS或LIS，并按照相应方法规定进行结果解释。

四、IVIS模型与LIS模型有什么区别？

IVIS和LIS都是用于BCOP试验结果评价的模型，但两者对应的浑浊度测量原理、数据计算方式及判定条件不同，不能简单理解为同一台设备中的两个软件选项。

IVIS模型

IVIS是体外刺激性评分，其基本计算形式为：

IVIS＝平均浑浊度＋15×平均OD490

根据2025版OECD TG 437：

• IVIS≤3：可判定为不需要进行眼刺激或严重眼损伤分类；

• IVIS≥55.1：可判定为GHS严重眼损伤类别1；

• 3＜IVIS＜55.1：通常不能仅依靠该结果完成分类，需要结合其他试验方法或证据进行综合评价。

LIS模型

LIS模型采用相应的光学数据评价角膜损伤。根据2025版OECD TG 437：

• LIS≤30：可判定为不需要进行眼刺激或严重眼损伤分类；

• LIS＞30且同时满足规定的渗透性或光学条件时，可判定为GHS严重眼损伤类别1；

• 其余结果一般属于不能单独完成分类的范围。

实验室应依据实际采用的法规、标准版本及内部SOP进行判定，不能把IVIS阈值直接套用于LIS数据，也不能把LIS阈值用于IVIS数据。

五、为什么很多客户会咨询OP3.0？

OP3.0是较早进入BCOP实验室的进口牛角膜浊度测量设备之一，因此，一些已经建立BCOP方法的实验室积累了OP3.0历史数据。

这类实验室在更新设备时，通常重点关注以下问题：

• 新设备是否采用IVIS评价模型；

• 浑浊度数据与原设备的趋势是否一致；

• 阳性对照和阴性对照能否满足接受标准；

• 是否可以进行方法转移或设备比对；

• 原始数据、计算结果和检测报告能否追溯；

• 角膜夹持器能否满足现有试验通量；

• 是否提供安装培训和后续技术服务。

需要特别注意，设备之间的数据相关性不能代替实验室内部的方法确认。更换设备后，建议根据质量体系要求开展适用性评价、对照品试验和人员能力确认。

六、牛角膜浊度仪选型需要关注哪些指标？

1. 先确定IVIS还是LIS

实验室应先明确准备采用的评价路径，再选择仪器配置。对于已有OP3.0方法和历史IVIS数据的实验室，通常更关注IVIS体系的延续性；计划建立LIS方法的实验室，则应选择对应的LIS配置。

2. 光源和光路稳定性

光源漂移、杂散光和角膜位置变化都可能影响测量结果。建议关注仪器光源类型、预热要求、重复测量稳定性以及日常检查方式。

3. 角膜夹持器的一致性

角膜夹持器既承担角膜固定作用，也构成前后腔体。密封性、装配一致性和透光位置会直接影响试验结果。

当前上海梅理 OPMaster牛角膜浊度仪配置方案中，角膜夹持器数量为10只，具体配置应以供货合同和技术清单为准。

4. 数据处理与追溯

建议关注软件能否完成样品信息记录、浑浊度数据采集、结果计算、对照组管理、报告输出及历史数据查询。对于有质量体系或数据完整性要求的实验室，还应提前确认用户权限、审计追踪及数据备份需求。

5. 是否包含完整试验配套

一套完整的BCOP试验系统通常可能涉及：

• 牛角膜浊度仪；

• 角膜夹持器；

• 恒温培养设备；

• OD490检测设备；

• 荧光素钠及培养介质；

• 牛眼运输和处理工具；

• 阳性对照、阴性对照及其他试验耗材。

采购前应确认报价范围，避免把“牛角膜浊度仪"误认为完整BCOP实验室的全部设备。

七、OPMaster牛角膜浊度仪的配置方式

 OPMaster牛角膜浊度仪目前分为两种配置：

• 标准版：IVIS模型，适合采用传统IVIS评价体系，以及关注OP3.0历史方法衔接的实验室；

• 高配版：LIS模型，适合计划采用LIS评价路径的实验室。

IVIS版和LIS版需要在采购时确定，并不是设备到场后通过软件自由切换。实验室在选型前，应根据适用标准、现有SOP、历史数据及未来检测项目进行综合判断。

设备采用稳定光源和专用角膜夹持结构，通过配套软件完成浑浊度检测及数据管理，可应用于化妆品、化学品、日化产品及相关科研领域的体外眼刺激评价。

八、结语

BCOP试验并不是单纯进行一次浑浊度测量，而是一套涵盖牛眼获取、角膜筛选、夹持安装、受试物暴露、浑浊度检测、渗透性检测和结果判定的完整试验体系。

对于准备建设BCOP实验室的单位，建议先确定适用法规和评价模型，再配置牛角膜浊度仪及相关配套设备；对于已有OP3.0等设备的实验室，则应重点考虑历史数据衔接、方法确认和质量体系要求。

曦源科学仪器（上海）有限公司可为用户提供 OPMaster牛角膜浊度仪的IVIS/LIS选型沟通、配置建议、安装培训及相关技术支持。