DNA 定量不准？A260/A280 正常也可能影响实验结果

在分子生物学和生物医药实验中，
DNA 定量是 PCR 扩增、NGS 建库和分子克隆等流程中重要的一步。

在实际工作中，很多实验人员都会依据 A260/A280 比值来判断 DNA 样品是否合格。但在一些实验场景下，即便 A260/A280 数值正常，后续实验仍然可能出现成功率不稳定、重复性较差等问题。

这类现象在超微量 DNA 定量中尤为常见。

A260/A280 正常，并不等于 DNA 定量一定准确

A260/A280 反映的是 260 nm 与 280 nm 吸光度的比例关系，
主要用于判断核酸与蛋白污染情况。

但需要注意的是，A260/A280 本身并不能保证 DNA 浓度测量的准确性。

在超微量分光定量条件下，如果光学系统的光程控制或杂散光抑制能力不足，就可能出现以下情况：

• A260/A280 比值正常

• 但 A260 的吸光度存在系统性偏差

• DNA 浓度被整体高估或低估

这种情况下，实验人员往往难以及时察觉定量误差的存在。

高浓度 DNA 样品，反而更容易出现定量误差

一个容易被忽视的现象是：
高浓度 DNA 样品在超微量测量中并不一定更可靠。

在高浓度条件下，杂散光、光学非线性等因素的影响会被放大，可能导致：

• 稀释前后测得浓度不一致

• 建库或扩增所需 DNA 投入量计算出现偏差

这也是为什么在 NGS 建库前，即便 DNA 纯度指标正常，实验结果仍可能波动较大的原因之一。

长期使用后的稳定性问题更隐蔽

在一些实验室中，超微量分光仪在使用初期数据表现良好，但在使用 2–3 年后，逐渐出现以下情况：

• 定量数值表面上仍然稳定

• 实验重复性却有所下降

这类问题往往并非设备故障，而是光学系统长期稳定性不足引起的缓慢漂移。

由于 A260/A280 比值变化不明显，这种风险往往难以通过常规指标直接发现。

为什么公共平台和企业实验室更关注“长期一致性"？

在高校公共实验平台和生物医药企业实验室中，
DNA 定量的核心需求不仅是“单次测量准确"，更重要的是：

不同人员、不同时间、不同批次测得的结果具有可比性。

因此，这类用户在评估超微量 DNA 定量方案时，往往更加关注：

• 光学系统一致性

• 杂散光控制能力

• 长期重复性和稳定性

在实际应用中，一些实验室在进行方案评估时，会将强调光学稳定性的超微量分光解决方案，作为常规方案之外的补充选择。例如，部分用户会关注像 IMPLEN 这类更偏工程稳定性设计思路的产品。

技术建议

如果在实际工作中遇到以下情况：

• DNA 稀释前后浓度不一致

• A260/A280 正常，但实验结果不稳定

• 不同时间测量同一样品存在波动

建议从定量方法和设备稳定性角度进行系统性评估，而不仅仅依赖单一指标判断。

在很多情况下，问题并不出在样品本身，而是定量结果的可靠性需要重新确认。